速看！国内著名医疗机构证实创新中药颗粒有效阻断乳腺癌肺转移！

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其远处转移是影响临床预后的关键问题。肿瘤转移前微环境(PMN)是介导肿瘤转移的先决条件。TAMs/CXCL1信号通路可以刺激c-Kit+/Sca-1+ HSPCs（造血干/祖细胞）的补充和分化为CD11b+/Gr-1+ MDSCs（髓源性抑制细胞），这是促进PMN形成的象征性事件。PMN的形成是一个涉及多个器官、多种细胞和多个靶点的整体过程。

中医以其整体的观点来看待疾病的治疗和预防。大量研究表明，中药不仅可以通过杀死癌细胞来抑制肿瘤的生长和转移，而且可以改善肿瘤或远端器官的免疫抑制微环境。国家1类创新药金蓉颗粒（消癖颗粒，XPS）上市以来以安全、有效、独特的治疗优势应用于乳腺疾病治疗领域。乳腺癌一般来源于乳腺上皮细胞的失控增殖和乳腺导管增生，非典型增生被认为是乳腺恶性肿瘤的前兆。有研究表明金蓉颗粒可显著降低TAMs（肿瘤相关巨噬细胞）和MDSCs在肿瘤实质中的群落数量，通过TAMs/CXCL1通路抑制肿瘤干细胞的活性，将可能成为乳腺癌高风险人群患者的一级预防和二级预防的新手段。

关于肿瘤转移前微环境（PMN）的研究逐渐成为热点。发表于《Cell Communication and Signaling》一篇名为“XIAOPI formula inhibits the pre-metastatic niche formation in breast cancer via suppressing TAMs/CXCL1 signaling”的一项研究揭示了金蓉颗粒通过抑制TAMs/CXCL1信号通路预防乳腺癌PMN形成的作用及其分子机制。

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一、金蓉颗粒体外抑制M2巨噬细胞极化及CXCL1表达

TAM巨噬细胞可被IL-4、TGF-β等诱导分化为M2表型。研究中首次用IL-4和IL-13在体外刺激RAW264.7使其进入M2表型，结果M1标记物iNOS水平下降、M2标记物ARG1水平上升，且M2抗原CD206比例升高（图2A）。进一步实验发现，金蓉颗粒对巨噬细胞M2表型RAW264.7的增殖有时间和剂量依赖性的抑制作用，反而对M1巨噬细胞增殖无明显抑制。结果显示金蓉颗粒对不同表型的巨噬细胞有选择性作用，而非一般免疫毒性（图2B）。

另外金蓉颗粒还能抑制M2表型巨噬细胞的极化（图2C），增加CD86表达，从而促进M2表型巨噬细胞的复极化，同时能够剂量依赖性抑制M2表型巨噬细胞CXCL1转录和表达（图2D、E），证明金蓉颗粒在体外可有效抑制TAMs/CXCL1信号转导。

图2、金蓉颗粒抑制M2巨噬细胞极化及CXCL1表达

二、金蓉颗粒体外通过抑制TAMs/CXCL1抑制HSPCs募集和MDSCs分化

造血干细胞（HSPCs）对微环境形成有重要调节作用。以往的研究表明，HSPCs的募集和MDSCs的分化是介导PMN形成的重要前提。研究通过流式细胞仪检测CXCL1对HSPCs分化的影响，结果表明，CXCL1能逐渐增加HSPCs中CD11b+/Gr-1+ MDSCs的数量（图3B）。金蓉颗粒能够阻断TAMs诱导的HSPCs侵袭增强（图3C、D），同时能够阻断TAMs对于HSPCs分化为MDSCs的促进作用（图3E）。由于MDSCs被认为是促进PMN形成的必要因素，这些研究结果表明金蓉颗粒可能通过抑制HSPCs招募和MDSCs分化，从而抑制PMN形成。

图3 金蓉颗粒通过抑制TAMs/CXCL1抑制HSPCs募集和MDSCs分化

三、金蓉颗粒抑制TAMs和HSPCs共培养的4T1细胞增殖和侵袭

上述研究表明，金蓉颗粒可能通过抑制MDSCs，阻断肿瘤免疫抑制微环境的形成。研究通过模拟肿瘤微环境（TME）验证金蓉颗粒对肿瘤细胞增殖和转移的影响，EdU细胞增殖实验和Transwell实验结果显示，TAMs能够显著增强HSPCs对肿瘤细胞或4T1细胞的增殖作用，金蓉颗粒或CXCL1中和抗体加入后可抑制这种促增殖作用，但CXCL1过表达能抵消该抑制（图4A、B）。此外金蓉颗粒还能抑制HSPCs诱导的MMP2和MMP9表达上调，从而减弱转移前微环境形成过程中的细胞外间质重构（图4C）。免疫荧光实验显示HSPCs促进了间充质细胞标记物Vimentin（波形蛋白）的表达，并下调了E-cadherin（钙黏蛋白E）的水平，金蓉颗粒能够通过抑制CXCL1抑制相关蛋白的表达及癌细胞的EMT（上皮-间质转化）过程（图4D）。可见，金蓉颗粒能抑制TME（肿瘤微环境）中癌细胞增殖和转移，抑制转移前微环境形成。

图4 金蓉颗粒抑制TAMs和HSPCs共培养的4T1细胞增殖和侵袭

四、金蓉颗粒体内抑制乳腺癌肺转移

为验证体外实验结论，研究将荧光素酶标记的4T1细胞注入BALB/c小鼠乳腺脂肪垫，评估金蓉颗粒体内抗转移效果（图5A）。结果显示金蓉颗粒能显著抑制肿瘤生长和抑制TAMs促癌作用，而CXCL1过表达会降低其抑制效果。荧光素酶显像实验表明，使用金蓉颗粒或敲除CXCL1基因能显著抑制TAMs诱导的癌细胞转移，而CXCL1过表达会消除其抗转移作用（图5E）。

此外，研究通过流式细胞仪检测消癖颗粒对肿瘤细胞比例的影响，结果显示金蓉颗粒能显著抑制肿瘤组织中F4-80+CD206+细胞和MDSCs的增殖，同时抑制肿瘤组织中的CXCL1基因表达（图5G），CXCL1过表达可逆转该抑制。这表明TAMs/CXCL1是金蓉颗粒抗癌和抑制转移的关键靶点之一。

图5、金蓉颗粒抑制乳腺癌肺转移

五、金蓉颗粒体内通过抑制CXCL1介导的MDSCs激活抑制TAMs诱导的小鼠肿瘤微环境形成

PMN被认为是促进转移性病灶形成的必要条件。免疫荧光结果发现，使用金蓉颗粒或者敲除CXCL1基因，可明显阻断TAMS诱导的MDSCs积累和肿瘤细胞浸润，而CXCL1过度表达则会让金蓉颗粒的抑制效果“失效”。HE染色结果显示，金蓉颗粒能抑制肺微转移灶形成，进一步证实消癖颗粒能通过抑制PMN的形成而阻止肺转移(图6D)。TAMs/CXCL1信号通路是触发骨髓源性细胞的关键信使。

图6 金蓉颗粒通过抑制CXCL1介导的MDSCs激活抑制TAMs诱导的小鼠肿瘤微环境形成

六、金蓉颗粒体内抑制HSPCs招募和向MDSCs分化

以上结果表明，金蓉颗粒能抑制MDSCs在靶器官的活化和积累。研究结果发现金蓉颗粒对肿瘤细胞或TAMs诱导的HSPCs富集有明显的抑制作用，而CXCL1过表达会降低其抑制效果，进一步说明TAMs/CXCL1是金蓉颗粒抗PMN作用的关键信号传导途径（图7A、B）。

流式细胞仪分析结果显示，肺组织中MDSCs数量变化与HSPCs基本一致，与骨髓中HSPCs数量变化趋势一致。金蓉颗粒能抑制TAMs诱导的MDSCs增多，CXCL1过表达阻断金蓉颗粒颗粒的抑制作用。

结果显示金蓉颗粒不仅能抑制HSPCs的增殖和分化，而且没有明显的毒副作用，从而抑制转移前微环境的形成，防止乳腺癌转移。

图7 金蓉颗粒抑制HSPCs招募和向MDSCs分化

研究表明金蓉颗粒能剂量依赖性地抑制M2极化和抑制CXCL1的mRNA和蛋白质表达，通过抑制TAMs/CXCL1信号转导，还能抑制TAMs/CXCL1诱导的HSPCs的募集和MDSCs的分化，可以阻止PMN的形成和肺转移。不仅提供了临床前证据支持金蓉颗粒应用于预防PMN形成，而且突出了TAMs/CXCL1在介导PMN建立中的新作用。

（本文内容源自公开发表的科学研究，用药请遵医嘱）

参考文献：Zheng Y, Wang N, Wang S, et al. XIAOPI formula inhibits the pre-metastatic niche formation in breast cancer via suppressing TAMs/CXCL1 signaling. Cell Commun Signal. 2020;18(1):48. Published 2020 Mar 26. doi:10.1186/s12964-020-0520-6

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来源: 奇绩金蓉